cardiotomskСибирский журнал клинической и экспериментальной медициныSiberian Journal of Clinical and Experimental Medicine2713-29272713-265XTSU publishing10.29001/2073-8552-2025-2710cardiotomsk-2710Research ArticleЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯEXPERIMENTAL STUDIESРазработка ВЭЖХ-методики определения амиодарона и дезэтиламиодарона в плазме крови человекаDevelopment of HPLC-methodology of determination of amiodarone and desethylamiodarone in human blood plasmahttps://orcid.org/0000-0002-0988-3642СитковаЕ. С.SitkovaE. S.

Ситкова Екатерина Сергеевна - канд. мед. наук, заведующий лабораторией высоких технологий диагностики и лечения нарушений ритма сердца, НИИ кардиологии Томского НИМЦ.

634012, Томск, ул. Киевская, 111а

Ekaterina S. Sitkova - Cand. Sci. (Med.), Head of the Laboratory of HighTechnology Diagnostics and Treatment of Cardiac Arrhythmias, Cardiology Research Institute, Tomsk NRMC.

111a, Kievskaya str., Tomsk, 634012

chekruzhova@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0003-1415-3932БаталовР. Е.BatalovR. E.

Баталов Роман Ефимович - д-р мед. наук, ведущий научный сотрудник, лаборатория высоких технологий диагностики и лечения нарушений ритма сердца, НИИ кардиологии Томского НИМЦ.

634012, Томск, ул. Киевская, 111а

Roman E. Batalov - Dr. Sci. (Med.), Leading Research Scientist, Laboratory of High-Technology Diagnostics and Treatment of Cardiac Arrhythmias, Cardiology Research Institute, Tomsk NRMC.

111a, Kievskaya str., Tomsk, 634012

romancer@rambler.ruhttps://orcid.org/0000-0003-2471-7287КургачевД. А.KurgachevD. A.

Кургачев Дмитрий Андреевич - канд. хим. наук, старший научный сотрудник, заместитель заведующего лабораторией физико-химических методов анализа, НИ ТГУ.

634050, Томск, пр. Ленина, 36

Dmitrii A. Kurgachev - Cand. Sci. (Chem.), Senior Research Scientist, Deputy Head of the Laboratory of physical-chemical analytical methods, NR TSU.

36, Lenin Ave., Tomsk, 634050

Kurgachev.tsu@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0002-1322-3698ГорнЕ. А.GornE. A.

Горн Екатерина Андреевна - инженер-исследователь, лаборатория исследования и применения сверхкритических флюидных технологий в агропищевых биотехнологиях (ЛИПСФТАБ), НИ ТГУ.

634050, Томск, пр. Ленина, 36

Ekaterina A. Gorn - Research Engineer, Laboratory of Supercritical Fluid Research and Application in Agrobiotechnology, NR TSU.

36, Lenin Ave., Tomsk, 634050

kataask12@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0002-5306-6172КазанцеваК. И.KazantcevaK. I.

Казанцева Ксения Игоревна - м.н.с., лаборатория исследования и применения сверхкритических флюидных технологий в агропищевых биотехнологиях (ЛИПСФТАБ), НИ ТГУ.

634050, Томск, пр. Ленина, 36

Kseniya I. Kazantceva - Laboratory Assistant, Laboratory of Supercritical Fluid Research and Application in Agrobiotechnology, NR TSU.

36, Lenin Ave., Tomsk, 634050

xenia.caz@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-7264-9904ДрагуноваМ. А.DragunovaM. A.

Драгунова Марина Александровна - канд. мед. наук, научный сотрудник, лаборатория высоких технологий диагностики и лечения нарушений ритма сердца, НИИ кардиологии Томского НИМЦ.

634012, Томск, ул. Киевская, 111а

Marina A. Dragunova - Cand. Sci. (Med.), Research Scientist, Laboratory of High-Technology Diagnostics and Treatment of Cardiac Arrhythmias, Cardiology Research Institute, Tomsk NRMC.

111a, Kievskaya str., Tomsk, 634012

kirsay@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8121-8287КриволаповС. Н.KrivolapovS. N.

Криволапов Сергей Николаевич - врач по рентгенэндоваскулярным диагностике и лечению, отделение хирургического лечения сложных нарушений ритма сердца и электрокардиостимуляции, НИИ кардиологии Томского НИМЦ

634012, Томск, ул. Киевская, 111а

Sergei N. Krivolapov - Interventional Electrophysiologist, Department of Surgical Arrhythmology and Cardiac Pacing, Cardiology Research Institute, Tomsk NRMC.

111a, Kievskaya str., Tomsk, 634012

cardiorhythm@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8689-8493МосковскихТ. В.MoskovskichT. V.

Московских Татьяна Валерьевна - канд. мед. наук, младший научный сотрудник, лаборатория высоких технологий диагностики и лечения нарушений ритма сердца, НИИ кардиологии Томского НИМЦ.

634012, Томск, ул. Киевская, 111а

Tatyana V. Moskovskich - Junior Research Scientist, Laboratory of HighTechnology Diagnostics and Treatment of Cardiac Arrhythmias, Cardiology Research Institute, Tomsk NRMC.

111a, Kievskaya str., Tomsk, 634012

moskovskih_tanya@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-1607-1482ПоповС. В.PopovS. V.

Попов Сергей Валентинович - д-р мед. наук, профессор, академик РАН, директор НИИ кардиологии Томского НИМЦ.

634012, Томск, ул. Киевская, 111а

Sergey V. Popov - Dr. Sci. (Med.), Professor, Academician of the Russian Academy of Sciences, Director, Cardiology Research Institute, Tomsk NRMC.

111a, Kievskaya str., Tomsk, 634012

svp@cardio-tomsk.ruНаучно-исследовательский институт кардиологии, Томский национальный исследовательский медицинский центр Российской академии наук (НИИ кардиологии Томского НИМЦ)РоссияCardiology Research Institute, Tomsk National Research Medical Center, Russian Academy of Sciences (Cardiology Research Institute, Tomsk NRMC)Russian FederationНациональный исследовательский Томский государственный университет (НИ ТГУ)РоссияThe National Research Tomsk State UniversityRussian Federation202512122025404169183Copyright © Ситкова Е.С., Баталов Р.Е., Кургачев Д.А., Горн Е.А., Казанцева К.И., Драгунова М.А., Криволапов С.Н., Московских Т.В., Попов С.В., 20252025Ситкова Е.С., Баталов Р.Е., Кургачев Д.А., Горн Е.А., Казанцева К.И., Драгунова М.А., Криволапов С.Н., Московских Т.В., Попов С.В.Sitkova E.S., Batalov R.E., Kurgachev D.A., Gorn E.A., Kazantceva K.I., Dragunova M.A., Krivolapov S.N., Moskovskich T.V., Popov S.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.sibjcem.ru/jour/article/view/2710Актуальность

Актуальность. Амиодарон широко используется в качестве антиаритмического препарата, однако его эффективность не всегда предсказуема, а побочные эффекты не полностью контролируемы. Для определения эффективной концентрации амиодарона в крови необходима разработка методики количественного анализа препарата в присутствии биологической матрицы.

Цель

Цель: разработать методику количественного определения амиодарона (АМИ) и дезэтиламиодарона (ДЭА) в плазме крови человека методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Материал и методы

Материал и методы. Метод разработан с использованием хромотографа Agilent 1260 Infinity (Agilent, США) с применением диодно-матричного детектора на экспериментальном образце колонки Tsunami C18 Pharm (250 × 4,6 mm, 5 μm) в условиях градиентного элюирования. Для защиты колонки от механических воздействий применялась предколонка Agilent Zorbax SB C8 (9,4 × 15 mm, 7 μm). Валидация проведена в соответствии с ОФС.1.1.0012.15 «Валидация аналитических методов» для следующих параметров: селективность, матричный эффект, линейность, точность, прецизионность, стабильность и предел количественного определения и обнаружения.

Результаты

Результаты. Пробоподготовка по методу QuEChERS была модифицирована для достижения оптимальных условий для извлечения АМИ и ДЭА из биологической матрицы. В качестве подвижной фазы А использовался буферный фосфат (pH 3, 7,5 mM), подвижной фазы B – 100% ацетонитрил. Режим элюирования – градиентный. До 7-й мин содержание фазы B составляло 55%, затем с 7-й мин до 7 мин 15 с наблюдалось увеличение содержания фазы B до 85% с целью элюирования более гидрофобных компонентов. С 7 мин 15 с до 15-й мин содержание фазы B не изменялось, а затем возвращалось к исходным 50% на 15 мин 15 с. Суммарное время анализа составило 18 мин; температура термостата – 30 °C; скорость потока – 1,2 мл/ мин; объем инжекции – 80 мкл; длина волны детектирования – 241 нм. Значение мешающего фактора для АМИ составило 2,25, для ДЭА – 1,44.

Выводы

Выводы. Авторами разработан и валидирован новый способ количественного определения АМИ и ДЕА в плазме крови человека.

Background

Background. Amiodarone is widely used as an antiarrhythmic drug, but its effectiveness is not entirely predictable, and its side effects are not completely controllable. To determine the effective concentration of amiodarone in the blood, a method for quantitative analysis of the drug in the presence of a biological matrix is needed.

Objective

Objective. To develop a procedure for quantitative determination of amiodarone (AMI) and desethylamiodarone (DEA) in blood plasma by high-performance liquid chromatography (HPLC).

Materials and Methods

Materials and Methods. The procedure was developed using an Agilent 1260 Infinity chromatograph with diode array detector (Agilent, USA) on a Tsunami C18 Pharm column (250×4.6 mm, 5 μm) with proprietary stationary phase. Agilent Zorbax SB C8 precolumn (9.4×15 mm, 7 μm) was used to protect the column from mechanical contaminants. Validation was performed according to OFS.1.1.0012.15 “Validation of Analytical Methods” for the following parameters: selectivity, matrix effect, linearity, accuracy, precision, stability and limits of detection and quantification.

Results

Results. The QuEChERS sample preparation was modified to achieve optimal conditions for the extraction of AMI and DEA from the biological matrix. Mobile phase A was phosphate buffer (pH 3, 7.5 mM), mobile phase B was 100% acetonitrile. The separation was performed in gradient mode. Up to 7.00 minutes – the B phase content was 55%, from 7.00 to 7.15 minutes – an increase in B phase content to 85% in order to elute the more hydrophobic components, from 7.15 to 15.00 minutes – the B phase content did not change, followed by a return to the original 50% at 15.15 min. The total analysis time was 18 minutes. Column thermostat temperature was set to 30 °C, flow rate – 1.2 mL/min; injection volume – 80 µL; selective wavelength was 241 nm. The value of retention factor for AMI was 2.25; for DEA – 1.44.

Conclusion

Conclusion. The authors have developed and validated the new HPLC procedure for quantitative identification of AMI and DEA in human blood plasma.

высокоэффективная жидкостная хроматографияамиодарондезэтиламиодаронплазма человекразработка методикиhigh-performance liquid chromatographyamiodaronedesethylamiodaronehuman plasmadevelopment of methodologyисследование было выполнено при поддержке НИИ кардиологии Томского НИМЦ (Томск, Россия)the study was performed with the support of the Cardiology Research Institute, Tomsk National Research Medical Center, Russian Academy of Sciences, Tomsk, Russia.ReferencesConnolly S.J. Evidence-based analysis of amiodarone efficacy and safety. Circulation. 1999;100(19):2025–2034. https://doi.org/10.1161/01.cir.100.19.2025Connolly S.J. Evidence-based analysis of amiodarone efficacy and safety. Circulation. 1999;100(19):2025–2034. https://doi.org/10.1161/01.cir.100.19.2025Шубик Ю.В., Медведев М.М., Михайлов Е.Н., Гасымова Н.З., Гиляров М.Ю. Лечение фибрилляции предсердий в России: реальная клиническая практика и рекомендации. Вестник аритмологии. 2021;28(2):55–63. https://doi.org/10.35336/VA-2021-2-55-63Шубик Ю.В., Медведев М.М., Михайлов Е.Н., Гасымова Н.З., Гиляров М.Ю. Лечение фибрилляции предсердий в России: реальная клиническая практика и рекомендации. Вестник аритмологии. 2021;28(2):55–63. https://doi.org/10.35336/VA-2021-2-55-63Татарский Б.А., Казеннова Н.В. Хроническая болезнь почек и фибрилляция предсердий: подходы к выбору антиаритмической терапии. Сибирский журнал клинической и экспериментальной медицины. 2023;38(4):20–28. https://doi.org/10.29001/2073-8552-2023-38-4-20-28Tatarsky B.A., Kazennova N.V. Chronic kidney disease and atrial fibrillation: approaches to the choice of antiarrhythmic therapy. Siberian Journal of Clinical and Experimental Medicine. 2023;38(4):20-28. (In Russ.) https://doi.org/10.29001/2073-8552-2023-38-4-20-28O'Bryan L.J., Redfern O.C., Bedford J., Petrinic T., Young J.D., Watkinson P.J. Managing new-onset atrial fibrillation in critically ill patients: a systematic narrative review. BMJ Open. 2020;10(3):e034774. https://doi.org/10.1136/bmjopen-2019-034774O'Bryan L.J., Redfern O.C., Bedford J., Petrinic T., Young J.D., Watkinson P.J. Managing new-onset atrial fibrillation in critically ill patients: a systematic narrative review. BMJ Open. 2020;10(3):e034774. https://doi.org/10.1136/bmjopen-2019-034774Holt D.W., Tucker G.T., Jackson P.R. Storey G.C. Amiodarone pharmacokinetics. Am. Heart J. 1983;106(4 Pt 2):840–847. https://doi.org/10.1016/0002-8703(83)90006-6Holt D.W., Tucker G.T., Jackson P.R. Storey G.C. Amiodarone pharmacokinetics. Am. Heart J. 1983;106(4 Pt 2):840–847. https://doi.org/10.1016/0002-8703(83)90006-6Adams P.C., Holt D.W., Storey G.C., Morley A.R., Callaghan J., Campbell R.W. Amiodarone and its desethyl metabolite: tissue distribution and morphologic changes during long-term therapy. Circulation. 1985;72(5):1064–1075. https://doi.org/10.1161/01.cir.72.5.1064Adams P.C., Holt D.W., Storey G.C., Morley A.R., Callaghan J., Campbell R.W. Amiodarone and its desethyl metabolite: tissue distribution and morphologic changes during long-term therapy. Circulation. 1985;72(5):1064–1075. https://doi.org/10.1161/01.cir.72.5.1064Nattel S., Talajic M., Fermini B., Roy D.Amiodarone: Pharmacology, clinical actions, and relationships between them. J. Cardiovasc. Electrophysiol. 1992;3(3):266–280. https://doi.org/10.1111/j.1540-8167.1992.tb00972.xNattel S., Talajic M., Fermini B., Roy D.Amiodarone: Pharmacology, clinical actions, and relationships between them. J. Cardiovasc. Electrophysiol. 1992;3(3):266–280. https://doi.org/10.1111/j.1540-8167.1992.tb00972.xConnolly S.J. Effect of prophylactic amiodarone on mortality after acute myocardial infarction and in congestive heart failure: meta-analysis of individual data from 6500 patients in randomised trials. Amiodarone trials meta-analysis investigators. Lancet (London, England). 1997;350(9089):1417–1424. PMID: 9371164Connolly S.J. Effect of prophylactic amiodarone on mortality after acute myocardial infarction and in congestive heart failure: meta-analysis of individual data from 6500 patients in randomised trials. Amiodarone trials meta-analysis investigators. Lancet (London, England). 1997;350(9089):1417–1424. PMID: 9371164Shenthar J., Rachaiah J.M., Pillai V., Chakali S.S., Balasubramanian V., Chollenhalli Nanjappa M. Incidence of drug-induced torsades de pointes with intravenous amiodarone. Indian Heart J. 2017;69(6):707–713. https://doi.org/10.1016/j.ihj.2017.05.024Shenthar J., Rachaiah J.M., Pillai V., Chakali S.S., Balasubramanian V., Chollenhalli Nanjappa M. Incidence of drug-induced torsades de pointes with intravenous amiodarone. Indian Heart J. 2017;69(6):707–713. https://doi.org/10.1016/j.ihj.2017.05.024Hohnloser S.H., Klingenheben T., Singh B.N. Amiodarone-associated proarrhythmic effects. A review with special reference to torsade de pointes tachycardia. Ann. Intern. Med. 1994;121(7):529–535. https://doi.org/10.7326/0003-4819-121-7-199410010-00009Hohnloser S.H., Klingenheben T., Singh B.N. Amiodarone-associated proarrhythmic effects. A review with special reference to torsade de pointes tachycardia. Ann. Intern. Med. 1994;121(7):529–535. https://doi.org/10.7326/0003-4819-121-7-199410010-00009Pérez-Ruiz T., Martínez-Lozano C., García-Martínez M.D. Simultaneous determination of amiodarone and its metabolite desethylamiodarone by high-performance liquid chromatography with chemiluminescent detection. Anal. Chim. Acta. 2008;623(1):89–95. https://doi.org/10.1016/j.aca.2008.06.003Pérez-Ruiz T., Martínez-Lozano C., García-Martínez M.D. Simultaneous determination of amiodarone and its metabolite desethylamiodarone by high-performance liquid chromatography with chemiluminescent detection. Anal. Chim. Acta. 2008;623(1):89–95. https://doi.org/10.1016/j.aca.2008.06.003Rodrigues M., Alves G., Ferreira A., Queiroz J., Falcão A. A rapid HPLC method for the simultaneous determination of amiodarone and its major metabolite in rat plasma and tissues: a useful tool for pharmacokinetic studies. J. Chromatogr. Sci. 2013;51(4):361–370. https://doi.org/10.1093/chromsci/bms149Rodrigues M., Alves G., Ferreira A., Queiroz J., Falcão A. A rapid HPLC method for the simultaneous determination of amiodarone and its major metabolite in rat plasma and tissues: a useful tool for pharmacokinetic studies. J. Chromatogr. Sci. 2013;51(4):361–370. https://doi.org/10.1093/chromsci/bms149Tieleman R.G., Gosselink A.T., Crijns H.J., van Gelder I.C., van den Berg M.P., de Kam P.J. et al. Efficacy, safety, and determinants of conversion of atrial fibrillation and flutter with oral amiodarone. Am. J. Cardiol. 1997;79(1):53–57. https://doi.org/10.1016/s0002-9149(96)00675-3Tieleman R.G., Gosselink A.T., Crijns H.J., van Gelder I.C., van den Berg M.P., de Kam P.J. et al. Efficacy, safety, and determinants of conversion of atrial fibrillation and flutter with oral amiodarone. Am. J. Cardiol. 1997;79(1):53–57. https://doi.org/10.1016/s0002-9149(96)00675-3Mostow N.D., Vrobel T.R., Noon D., Rakita L. Rapid suppression of complex ventricular arrhythmias with high-dose oral amiodarone. Circulation. 1986;73(6):1231–1238. https://doi.org/10.1161/01.cir.73.6.1231Mostow N.D., Vrobel T.R., Noon D., Rakita L. Rapid suppression of complex ventricular arrhythmias with high-dose oral amiodarone. Circulation. 1986;73(6):1231–1238. https://doi.org/10.1161/01.cir.73.6.1231Rotmensch H.H., Swanson B.N., Greenspon A.J., Shoshani D., Greenspan A.M. Amiodarone: individualizing dosage with serum concentrations. Pacing Clin. Electrophysiol. 1983;6(6):1327–1335. https://doi.org/10.1111/j.1540-8159.1983.tb04475.xRotmensch H.H., Swanson B.N., Greenspon A.J., Shoshani D., Greenspan A.M. Amiodarone: individualizing dosage with serum concentrations. Pacing Clin. Electrophysiol. 1983;6(6):1327–1335. https://doi.org/10.1111/j.1540-8159.1983.tb04475.xHaffajee C.I., Love J.C., Canada A.T., Lesko L.J., Asdourian G., Alpert J.S. et al. Clinical pharmacokinetics and efficacy of amiodarone for refractory tachyarrhythmias. Circulation. 1983;67(6):1347–1355. https://doi.org/10.1161/01.cir.67.6.1347Haffajee C.I., Love J.C., Canada A.T., Lesko L.J., Asdourian G., Alpert J.S. et al. Clinical pharmacokinetics and efficacy of amiodarone for refractory tachyarrhythmias. Circulation. 1983;67(6):1347–1355. https://doi.org/10.1161/01.cir.67.6.1347Debbas N.M., du Cailar C., Bexton R.S., Demaille J.G., Camm A.J., Puech P. The QT interval: a predictor of the plasma and myocardial concentrations of amiodarone. Br. Heart J. 1984;51(3):316–320. https://doi.org/10.1136/hrt.51.3.316Debbas N.M., du Cailar C., Bexton R.S., Demaille J.G., Camm A.J., Puech P. The QT interval: a predictor of the plasma and myocardial concentrations of amiodarone. Br. Heart J. 1984;51(3):316–320. https://doi.org/10.1136/hrt.51.3.316

The authors declare that there are no conflicts of interest present.