Разработка ВЭЖХ-методики определения амиодарона и дезэтиламиодарона в плазме крови человека

Актуальность. Амиодарон широко используется в качестве антиаритмического препарата, однако его эффективность не всегда предсказуема, а побочные эффекты не полностью контролируемы. Для определения эффективной концентрации амиодарона в крови необходима разработка методики количественного анализа препарата в присутствии биологической матрицы.

Цель. Разработать методику количественного определения амиодарона (АМИ) и дезэтиламиодарона (ДЭА) в плазме крови человека методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Материал и методы. Метод разработан с использованием хромотографа Agilent 1260 Infinity (Agilent, США) с использованием диодно-матричного детектора на экспериментальном образце колонки Tsunami C18 Pharm (250×4,6 mm, 5 μm) в условиях градиентного элюирования. Для защиты колонки от механических воздействий применялась предколонка Agilent Zorbax SB C8 (9,4×15 mm, 7 μm). Валидация проведена в соответствии с ОФС.1.1.0012.15 «Валидация аналитических методов» для следующих параметров: селективность, матричный эффект, линейность, точность, прецизионность, стабильность и предел количественного определения и обнаружения.

Результаты. Пробоподготовка по методу QuEChERS была модифицирована для достижения оптимальных условий для извлечения АМИ и ДЭА из биологической матрицы. В качестве подвижной фазы А использовался буферный фосфат (pH 3, 7,5 mM), подвижной фазы B – 100% ацетонитрил. Режим элюирования – градиентный. До 7,00 мин содержание фазы B составляло 55%, затем с 7,00 до 7,15 мин наблюдалось увеличение содержания фазы B до 85% с целью элюирования более гидрофобных компонентов. С 7,15 до 15,00 мин содержание фазы B не изменялось, а затем возвращалось к исходным 50% на 15,15 мин. Суммарное время анализа составило 18 мин; температура термостата – 30 °C; скорость потока – 1,2 мл/мин; объем инжекции – 80 мкл; длина волны детектирования – 241 нм. Значение мешающего фактора для АМИ составило 2,25, для ДЭА – 1,44.

Выводы. Авторами разработан и валидирован новый способ количественного определения АМИ и ДЕА в плазме крови человека.

1. Connolly S.J. Evidence-based analysis of amiodarone efficacy and safety. Circulation. 1999;100(19):2025–2034. https://doi.org/10.1161/01.cir.100.19.2025

2. Шубик Ю.В., Медведев М.М., Михайлов Е.Н., Гасымова Н.З., Гиляров М.Ю. Лечение фибрилляции предсердий в России: реальная клиническая практика и рекомендации. Вестник аритмологии. 2021;28(2):55–63. https://doi.org/10.35336/VA-2021-2-55-63

3. Татарский Б.А., Казеннова Н.В. Хроническая болезнь почек и фибрилляция предсердий: подходы к выбору антиаритмической терапии. Сибирский журнал клинической и экспериментальной медицины. 2023;38(4):20–28. https://doi.org/10.29001/2073-8552-2023-38-4-20-28

4. O'Bryan L.J., Redfern O.C., Bedford J., Petrinic T., Young J.D., Watkinson P.J. Managing new-onset atrial fibrillation in critically ill patients: a systematic narrative review. BMJ Open. 2020;10(3):e034774. https://doi.org/10.1136/bmjopen-2019-034774

5. Holt D.W., Tucker G.T., Jackson P.R. Storey G.C. Amiodarone pharmacokinetics. Am. Heart J. 1983;106(4 Pt 2):840–847. https://doi.org/10.1016/0002-8703(83)90006-6

6. Adams P.C., Holt D.W., Storey G.C., Morley A.R., Callaghan J., Campbell R.W. Amiodarone and its desethyl metabolite: tissue distribution and morphologic changes during long-term therapy. Circulation. 1985;72(5):1064–1075. https://doi.org/10.1161/01.cir.72.5.1064

7. Nattel S., Talajic M., Fermini B., Roy D. Amiodarone: Pharmacology, clinical actions, and relationships between them. J. Cardiovasc. Electrophysiol. 1992;3(3):266–280. https://doi.org/10.1111/j.1540-8167.1992.tb00972.x

8. Connolly S.J. Effect of prophylactic amiodarone on mortality after acute myocardial infarction and in congestive heart failure: meta-analysis of individual data from 6500 patients in randomised trials. Amiodarone trials meta-analysis investigators. Lancet (London, England). 1997;350(9089):1417–1424. PMID: 9371164

9. Shenthar J., Rachaiah J.M., Pillai V., Chakali S.S., Balasubramanian V., Chollenhalli Nanjappa M. Incidence of drug-induced torsades de pointes with intravenous amiodarone. Indian Heart J. 2017;69(6):707–713. https://doi.org/10.1016/j.ihj.2017.05.024

10. Hohnloser S.H., Klingenheben T., Singh B.N. Amiodarone-associated proarrhythmic effects. A review with special reference to torsade de pointes tachycardia. Ann. Intern. Med. 1994;121(7):529–535. https://doi.org/10.7326/0003-4819-121-7-199410010-00009

11. Pérez-Ruiz T., Martínez-Lozano C., García-Martínez M.D. Simultaneous determination of amiodarone and its metabolite desethylamiodarone by high-performance liquid chromatography with chemiluminescent detection. Anal. Chim. Acta. 2008;623(1):89–95. https://doi.org/10.1016/j.aca.2008.06.003

12. Rodrigues M., Alves G., Ferreira A., Queiroz J., Falcão A. A rapid HPLC method for the simultaneous determination of amiodarone and its major metabolite in rat plasma and tissues: a useful tool for pharmacokinetic studies. J. Chromatogr. Sci. 2013;51(4):361–370. https://doi.org/10.1093/chromsci/bms149

13. Tieleman R.G., Gosselink A.T., Crijns H.J., van Gelder I.C., van den Berg M.P., de Kam P.J. et al. Efficacy, safety, and determinants of conversion of atrial fibrillation and flutter with oral amiodarone. Am. J. Cardiol. 1997;79(1):53–57. https://doi.org/10.1016/s0002-9149(96)00675-3

14. Mostow N.D., Vrobel T.R., Noon D., Rakita L. Rapid suppression of complex ventricular arrhythmias with high-dose oral amiodarone. Circulation. 1986;73(6):1231–1238. https://doi.org/10.1161/01.cir.73.6.1231

15. Rotmensch H.H., Swanson B.N., Greenspon A.J., Shoshani D., Greenspan A.M. Amiodarone: individualizing dosage with serum concentrations. Pacing Clin. Electrophysiol. 1983;6(6):1327–1335. https://doi.org/10.1111/j.1540-8159.1983.tb04475.x

16. Haffajee C.I., Love J.C., Canada A.T., Lesko L.J., Asdourian G., Alpert J.S. et al. Clinical pharmacokinetics and efficacy of amiodarone for refractory tachyarrhythmias. Circulation. 1983;67(6):1347–1355. https://doi.org/10.1161/01.cir.67.6.1347

17. Debbas N.M., du Cailar C., Bexton R.S., Demaille J.G., Camm A.J., Puech P. The QT interval: a predictor of the plasma and myocardial concentrations of amiodarone. Br. Heart J. 1984;51(3):316–320. https://doi.org/10.1136/hrt.51.3.316